本发明属于生物医药领域，具体涉及一株G2b亚型猪流行性腹泻病毒致弱毒株的制备及其应用。所述G2b亚型猪流行性腹泻病毒致弱毒株是JSX2014/ATT，它的保藏号是CCTCC NO.V201865；它的基因组序列如SEQ ID NO.37所示。本发明还公开了该弱毒株JSX2014/ATT在制备G2b亚型猪流行性腹泻病毒变异毒株弱毒疫苗中的应用。本发明通过Vero细胞连续传代和空斑纯化，筛选出致弱的G2b亚型PEDV弱毒株JSX2014/ATT株，在Vero细胞上复制性能稳定，效价高，可用于进一步研制G2b亚型PEDV变异毒株弱毒苗。