本发明公开了一种绿色氧化纳米金刚石胶体溶液的制备及二次分散的方法和抗菌应用。工艺过程为：将纳米金刚石原粉与双氧水进行机械研磨，超声得到澄清透明的胶体溶液；将所得的胶体溶液进行旋转蒸发，得到纳米金刚石含量为20～70％的膏状物；将该膏状物溶在水中能重新得到澄清透明的胶体溶液。本发明制备的纳米金刚石胶体溶液可应用于精密研磨、抛光加工、复合材料、润滑油、医药卫生等领域，同时此发明实现了纳米金刚石的二次分散，使分散好的纳米金刚石在运输上更加方便，实用性增强。