本发明提供了一种多能干细胞及其分化的T细胞和应用，所述多能干细胞包含有Runx1和Hoxa9串联共表达载体。本发明将外源Runx1和Hoxa9共表达载体引入多能干细胞中，成功构建了诱导性共表达外源Runx1和Hoxa9的多能干细胞，所述多能干细胞定向分化为T谱系祖细胞，并将发育为T细胞。使用本发明的方法获得的多能干细胞来源的T细胞，不仅功能正常，而且没有致瘤风险。