本发明涉及一株牛睾丸传代细胞株的建立及其应用。该方法包括：(1)利用新鲜牛睾丸制备原代细胞并建立牛睾丸细胞系ZJS‑1株；(2)采用单层细胞法培养牛睾丸传代细胞生产猪瘟活疫苗；(3)采用悬浮细胞法培养牛睾丸细胞生产猪瘟活疫苗。本发明建立的牛睾丸细胞系用于猪瘟活疫苗生产具有生产工艺简单且稳定、易操作，病毒含量高，批间差异小，质量易控，可显著提高疫苗产量和质量。利用本发明生产的猪瘟活疫苗安全性好、免疫效力高，对猪瘟强毒攻击具有完全的免疫保护作用。