本发明公开了一种测定L‑脯氨酰胺合成工艺杂质或其结构类似物对照品含量的方法，首先选定溶剂以及内标物，定量峰；设定优化的核磁共振分析的波谱仪参数，在该参数下测定八氢‑4H‑二吡咯并[1, 2‑b : 2’, 1’‑g][1, 2, 5]三氮杂卓‑4, 6(5H)‑二酮或其结构类似物样品和内标物中各定量目标峰的积分面积从而计算出含量；本发明的测定方法是在对照品量比较少的情况下进行赋值的一种行之有效的方法；且针对无现成标品的测定对象来说具有可行性，且与传统的质量平衡法相比，除了消耗样品量低至4mg之外，更加的简单、快速；本发明的测定方法为八氢‑4H‑二吡咯并[1, 2‑b : 2’, 1’‑g][1, 2, 5]三氮杂卓‑4, 6(5H)‑二酮及其结构类似物提供了一个简单、可靠的定量方法。