本发明提供了一种恩曲替尼耐药肺癌细胞系的建立方法及其在医药研究中的应用，属于生物医学技术领域。本发明提供的恩曲替尼耐药肺癌细胞系的建立方法，通过使用浓度逐步升高含有恩曲替尼药液的培养基对肺癌细胞进行冲击培养，逐步提高细胞的耐药能力，获得恩曲替尼的耐药肺癌细胞；并将耐药细胞应用到药物研究中，具有较好的研究利用价值。