本发明涉及一种高纯度桑皮苷C的制备方法，其包括a.粉碎桑白皮药材，过筛，以乙醇水溶液为提取溶剂，采用超声波法或渗漉法进行提取，减压浓缩得到乙醇提取物浸膏；b.乙醇提取物浸膏以温热水混悬后，通入大孔吸附树脂进行层析处理，先用水洗脱后，用20％乙醇水溶液进行洗脱，收集洗脱液，减压浓缩得到浓缩物；c.将浓缩物通过硅胶柱进行层析处理，用氯仿‑甲醇‑水混合液取下层洗脱，收集洗脱液，浓缩得到桑皮苷C粗品；d.将桑皮苷C粗品通过制备反相硅胶柱进行层析处理，以乙腈水溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥得到桑皮苷C纯品。本发明工艺简单可控、得率高、适于放大生产高纯度桑皮苷C。