本发明公开了一种E7蛋白检测试剂盒及其检测方法和应用，E7蛋白检测试剂盒，包括如下组分：E7免疫磁微粒，抗试剂，蛋白释放剂，E7校准品，E7质控品，清洗液和底物液。本发明的试剂盒及检测方法具有稳定性好，灵敏度高，重复性好等优点，该检测体系能够随机上样，任意组合，连续检测，同时大大缩短了检测时间，1小时能完成60‑70个测试，而且操作简单方便，真正实现了检测全自动化，避免了人为操作带来的结果偏差，降低了宫颈癌检测费用，适用于大规模推广应用。