本发明涉及一种测定恒河猴血清中T‑DM1释放DM1浓度的检测方法，包括以下步骤：加样，取食蟹猴血清样品25.0μL，置于1.5mL离心管中，加25.0μL内标工作液和25.0μL二硫苏糖醇溶液，涡流1min；还原反应，40℃水浴孵化1h；蛋白沉淀处理，加入200μL二硫苏糖醇甲醇溶液，涡流1min，以14000rpm离心5min；仪器检测，取10μL进行LC‑MS/MS分析。本发明主要解决原有技术灵敏度低、样品消耗量大、操作复杂等问题。