本发明提供一种同时测定防己药材中粉防己碱和防己诺林碱含量的方法，具体步骤包括：A、提取液制备：防己药材粉碎，称取适量药粉，2％盐酸甲醇提取，常温超声，中速滤纸初滤，取滤液用微孔滤膜过滤，得提取液。提取液以粉防己碱和防己诺林碱为对照品；B、调节高效液相色谱仪检测条件：色谱柱：Agilent ZORBAX Extend‑C18(4.6×250mm，5μm)，流动相乙腈‑0.08％三乙胺水(75∶25)，等度洗脱，进样量8μl，流速1.0mL·min‑1，柱温25℃，检测波长282nm；C、进样，等待供试品及对照品结果，按外标法以峰面积计算，分别计算各供试品中粉防己碱和防己诺林碱组分的含量。经过长期反复验证，确证本方法准确度、精密度、专属性高，色谱条件耐用性良好。