本发明公开了一种双酶法制备可溶性的酵母葡聚糖寡糖的方法，属于生物医药领域。本发明制备可溶酵母葡聚糖寡糖以提取的水不溶性的酿酒酵母葡聚糖为底物，经微生物细胞异源表达的β‑1, 3‑葡聚糖水解酶和β‑1, 6‑葡聚糖水解酶催化形成具有生物活性的水溶性的小分子酵母葡聚糖寡糖。本发明为具有生物活性的可溶酵母葡聚糖的工业化生产方式提供了新的途径。