本发明涉及一种异烟肼或其药物组合物中杂质的含量测定方法，所述方法包括以下步骤：步骤1，杂质对照品溶液的配制：精密称取异烟酸、异烟酰胺对照品适量，用水溶解并定量稀释，作为异烟酸和异烟酰胺对照品溶液；步骤2，供试品溶液的配制：取供试品适量，加水使异烟肼溶解并稀释，滤过，取续滤液作为供试品溶液；步骤3，对照溶液的配制：精密量取供试品溶液稀释100倍，作为对照溶液；步骤4，测定法：精密量取杂质对照品溶液、供试品溶液和对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，根据色谱图，采用峰面积法计算异烟酸、异烟酰胺及其他杂质的含量。