本发明公开了一种用于生物检测的微流控芯片及其制备方法，微流控芯片包括芯片硬质下面板、芯片柔性上面板、气泵控制装置和光学检测装置，芯片硬质下面板设有多个腔室用于储存、混合或检测样品，各腔室之间有流道连通并设有常闭微阀，芯片柔性上面板设有独立的半球形帽，与下面板的腔室一一对应，其顶端设有常闭充气口；气泵控制系统含有多个充气头，与各腔室半球形帽部顶端的常闭充气口一一对应，实现对各个充气口及所连腔室的充气操作；光学检测装置进行样品浓度的定量检测。制备过程中对特定的腔室预分装处理。本发明简化了生物检测的操作步骤，提高了检测效率与精度，降低了生产成本。