本发明属于生物医药领域，涉及大肠杆菌周质空间表达抗TNF抗体Fab片段的提取方法。所述的提取方法是用含有醋酸钠、EDTA和氯化钠的提取液提取发酵获得的表达抗TNF抗体Fab片段的重组大肠杆菌工程菌，并在将所述的提取液与所述的发酵获得的重组大肠杆菌工程菌混合后调节pH至8.0‑9.5之间进行提取。用本发明的提取方法提取大肠杆菌周质空间表达抗TNF抗体Fab片段，可以在保证提取目标蛋白质收量的基础上尽量提高提取目标蛋白质的纯度，从而降低后续蛋白质层析纯化的难度和/或成本，使后续蛋白质层析纯化的方案易于设计和实现。