本发明公开了一种人源视网膜色素上皮细胞(RPE)的程序性降温冻存的方法，属于生物医学技术领域。所述方法包括：(1)成熟RPE细胞的消化处理：对培养成熟的人源视网膜色素上皮细胞RPE细胞采用酶消化法进行收集，计数，用冻存液重悬细胞，分装至冻存管；(2)将所述冻存管转移至程序性降温仪中进行冷冻冻存；(3)获得冻存的人源视网膜色素上皮细胞。本发明方法通过使用程序性降温仪按特定的降温程序对人源视网膜色素上皮细胞进行冻存。本发明利用不同降温程序冻存RPE细胞，进而摸索最佳的冻存程序。本发明提供的人源视网膜色素上皮细胞的冻存方法为短期或者长期保存，以及今后使用的RPE细胞治疗AMD(老年黄斑变性)等RPE损伤疾病提供了新来源。