专利名称 | 一种融合蛋白及其制备利拉鲁肽中间体多肽的方法 | ||
申请号 | CN201910195438.2 | 申请日 | |
公开(公告)号 | CN109879970A | 公开(公告)日 | |
申请(专利权)人 | 美药星(南京)制药有限公司; 南京汉欣医药科技有限公司 | 发明人 | 潘尚书; 汤传根; 李宬; 刘晓锐; 崔怀言; 陈松; 张昊宁 |
专利来源 | 国家知识产权局 | 转化方式 | |
摘要 |
本发明属于多肽制备方法技术领域,特别涉及一种融合蛋白及其制备利拉鲁肽中间体多肽GLP‑1(7‑37)的方法。其主要步骤包括构建重组利拉鲁肽中间体工程菌,通过培养和诱导大肠杆菌表达GLP‑1(7‑37)融合蛋白,再经过变性、复性、酶切和分离纯化得到中间体多肽GLP‑1(7‑37)。通过改变前导肽序列,表达方式变为胞内不溶性包涵体表达,表达量显著增加;洗涤后的包涵体采用碱性溶解,无需使用大量的变性剂,以蛋白浓度为5‑40g/L的高浓度加入包涵体溶解缓冲液,变复性时间不超过1h,溶解后可以立即进行肠激酶酶切;减少复性工序,缩小酶切体系,降低化学试剂成本,有利于工业化放大;采用离子交换分离纯化,分离度高。本发明制备的利拉鲁肽中间体多肽GLP‑1(7‑37)达到92%以上,收率大于87%。 |
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