本发明属于沃诺拉赞检测技术领域，公开了一种血浆中沃诺拉赞的定量检测方法，包括以下步骤：(1)标准工作溶液的配制：沃诺拉赞工作溶液及内标工作溶液均在‑20℃下保存，备用；(2)校正标样的配制：分别加入空白血浆样品，混匀，配制成多个校正标样；(3)样品处理：等体积地取多个校正标样及待测血浆样品，分别加入步骤(1)中的内标工作溶液，分别加入乙腈，混匀，离心，取上清液，保存待用；(4)LC‑MS/MS分析测定；(5)标准曲线制作(6)定量分析：按照步骤(4)，等量取待测血浆样品对应的上清液，进行LC‑MS/MS分析测定。本发明的定量检测方法具备操作简单、分离效果好、定性准确、样品分析时间短及检测灵敏度高的特点。