本发明涉及一种伯氨喹类药物的比色检测方法，在酸性环境以及亚硝酸盐存在的条件下，对位含有取代基的苯胺可以与伯氨喹发生Griess反应，形成有色偶氮产物；确定上述有色产物的UV‑Vis吸收光谱以及最大吸光值；通过酶标仪检测不同浓度伯氨喹存在下，上述有色偶氮产物的形成及其吸光值的变化；建立伯氨喹浓度与偶氮产物吸光值的标准曲线；通过标准曲线上伯氨喹的浓度与偶氮产物吸收光值的对应关系，确定待测样品中伯氨喹类药物的浓度。该方法已成功用于定量分析合成尿液中伯氨喹的浓度，检出限低至0.63μM。该方法还能在临床相关的浓度范围内从血清样品中检测伯氨喹。