本发明公开了一种来源于马赛梭菌(Clostridium Marseille)的7β‑羟基类固醇脱氢酶、编码基因、载体，以及其在生物催化制备熊去氧胆酸中间体3, 12‑二酮‑7β‑胆烷酸中的应用，所述7β‑羟基类固醇脱氢酶的氨基酸序列如SED ID NO : 1所示；本发明提供了一种立体选择性制备3, 12‑二酮‑7β‑胆烷酸的新7β‑羟基类固醇脱氢酶；通过该7β‑羟基类固醇脱氢酶可制备熊去氧胆酸中间体3, 12‑二酮‑7β‑胆烷酸；本发明中所述3, 12‑二酮‑7β‑胆烷酸制备方法具有光学纯度高、条件温和、环境友好等优点，具有较高的工业化应用潜力。