本发明属于生物技术领域，具体为一种嗜热菌RNA连接酶RTCB在低温催化RNA连接和DNA环化中的应用。本发明包括：在70℃~37℃温度条件下，嗜热RTCB用于完成DNA环化激活反应，用于完成RNA环化的激活反应和RNA连接反应。本发明可应用于商业化生产，鉴于嗜热菌蛋白RTCB在纯化上的简便操作及广泛的温度适应性，将极大的拓阔其应用范围。在生物医药工业领域具有广泛的应用前景。