本发明涉及一种交联脱细胞羊膜、复合型皮肤替代物及其制备方法和应用。所述交联脱细胞羊膜的制备方法包括如下步骤：将脱细胞羊膜浸泡于MES缓冲液中，加入水溶性碳二亚胺浓度为0.01‑0.1mmol/mg，交联反应1‑10min，清洗，真空冷冻干燥即得。本发明制备获得的交联脱细胞羊膜保留了基底膜的细胞因子，同时机械强度增强。本发明获得脱细胞羊膜作为培养基质制备的复合型皮肤替代物，能够用于创面修复。