本发明公开了一种三阴性乳腺癌顺铂耐药细胞株，该细胞株命名为人三阴性乳腺癌耐药细胞株MDA‑MB‑231/DDP，其保藏编号为CGMCC No.10406。此外，本发明还公开了该耐药细胞株的制备方法及其在制备乳腺癌耐药逆转药物中的应用。本发明可用于分析三阴性乳腺癌细胞DDP耐药后的形态学及生物学表型的变化；研究肿瘤对DDP耐药的分子机制和逆转肿瘤耐药的方法及筛选其他抗肿瘤药物；发现肿瘤耐药标志物以及筛选和评估新型抗肿瘤药物等，具有较高的科研和生产应用价值。经实验验证，本发明三阴性乳腺癌顺铂耐药细胞株MDA‑MB‑231/DDP的耐药指数为11，具有较高的耐药性，可用于制备乳腺癌耐药逆转药物。