本发明公开了一种酯酶PHE14及其编码基因和应用。本发明从海洋假单胞菌(Pseudomonadaceae oryzihabitans)HUP022中开发得到新的酯酶基因PHE14，全长为645bp，其编码的酯酶PHE14含有214个氨基酸。通过克隆酯酶基因PHE14并将其连接表达载体pET‑28a(+)后转化大肠杆菌BL21(DE3)，培养并诱导表达后，得到了重组表达的酯酶PHE14。酯酶PHE14可用于制备手性乳酸甲酯，利用重组表达的酯酶PHE14作为催化剂，制备得到了光学纯度大于99％的(S)‑乳酸甲酯。酯酶PHE14在生物化工和生物医药等领域具有非常大的应用价值。