本发明提供了一种从蛇毒中提取凝血因子X激活剂的方法，以及所述方法提取的凝血因子X激活剂在制备止血药和治疗出血性疾病的药物中的用途。本发明的方法包括羟基磷灰石柱层析步骤，其中层析条件如下：填料为I型或II型羟基磷灰石填料，洗脱液为含NaCl的pH值为6.5‑7.5的磷酸缓冲液，其中磷酸缓冲液的浓度为10mM‑30mM；NaCl的浓度为0.1M‑0.8M。本发明的方法以蛇毒为原材料，首次将羟基磷层析方法应用到规模化提取凝血因子X激活剂的方法中。本发明方法获得的最终产品的比活性高，纯度高，收率高；没有透析操作，工艺稳定，适合大规模生产；层析柱可反复使用，节约成本。