本发明公开一种汗腺细胞的分离和培养获得汗腺类器官的方法及其应用，属于生物工程技术领域，其中所述汗腺细胞的分离方法采用消化酶的组合进行多步分离，可以实现高效分离汗腺细胞。分离获得的汗腺细胞中含有干性细胞，可用于通过本发明提供的三维培养基进行培养，获得具有高细胞活性和双向分化潜能的汗腺类器官，将其移植到足底和背部全层损伤小鼠后不仅能够促进汗腺的再生及功能的恢复，而且可以促进皮肤创面的愈合，能用于制备修复皮肤损伤并且恢复附属器官功能的细胞产品，应用前景广阔。