本发明公开了一种兽用A型产气荚膜梭菌类毒素的制备方法及其应用。所述类毒素制备方法如下：将A型产气荚膜梭菌生产菌株接种于培养基中发酵培养，得到发酵产物，然后将发酵产物在L‑赖氨酸、甲醛水溶液和pH6.8下灭活脱毒，灭活脱毒合格的菌液离心上清即为类毒素。所述培养基包括如下物质：酪蛋白胨、酵母浸粉、CaCl2、ZnSO4·7H2O、Na2HPO4·12H2O、KH2PO4、葡萄糖。按本发明方法制备的A型产气荚膜梭菌毒素的毒力最高可提至制苗标准的12.5倍，用其制备的类毒素在家兔上的一免、二免血清中和效价也分别最高可提至传统工艺的4和50倍，血清效价成本比可最高提至传统工艺的48.8、1216.4倍。