本发明公开了一种从尿液中分离黄柏碱葡萄糖醛酸结合物的方法。该方法步骤为：尿液样品经两次AB‑8大孔吸附树脂分离后再用ODS开放柱对代谢物进行富集；再用Sephadex LH20凝胶柱纯化；所得流份用Agilent 1200型制备液相制备目标产物，并用LC‑MSn分析验证对其结构进行鉴定。本方法分离提取了体内黄柏碱代谢产物，并确认其化学结构及定量分析，为分析其裂解规律，转化关系，体内药代动力学研究，药理作用机理研究提供了可行性条件及实验依据。具有操作简单、成本低、效率高等优点。