本发明涉及一种产人胰岛素原的毕赤酵母发酵培养基，该培养基配方为：蛋白胨1～20g/L，黄豆粉1～10g/L，85％磷酸13～14ml/L，碳酸钙0.3～0.4g/L，七水硫酸镁7.0～8.0g/L，硫酸铵6～10g/L，氢氧化钾1.5～2.5g/L，甘油40.0g/L，PTM1溶液4.35ml/L，pH为5～6；本发明还包括基于上述培养基利用毕赤酵母产人胰岛素原的发酵方法，利用本方法，人胰岛素原表达量可提高43％，并且大幅减少发酵时间24～42小时，获得了比常规方法更高的产率。