本发明公开了一种快速高效测定吐温80含量的比色方法。该方法系在水性介质中，使吐温80的聚乙氧基与硫氰酸钴铵盐在沸水浴加热条件下快速显色反应，定量生成不溶于水的蓝色显色产物，待冷却至室温后，定量加入有机溶剂萃取显色产物，比色法测定吐温80含量。本发明方法适用于各种药物制剂中药用辅料吐温80的快速定量测定，为相关产品中吐温80的定量控制提供了一种便捷、可靠的检测手段。