一种微生物培养基灭菌接种一体装置，包括接种箱，所述的接种箱内设有升降隔板，升降隔板将接种箱内部分隔为三个区域，升降隔板分隔所形成的三个区域分别为灭菌室、接种室和取物室；灭菌室下方设有水箱，水箱内设有电加热管，水箱与灭菌室之间的接种箱箱壁上设有多个透气孔；接种室内设有接种针。采用上述结构，能够实现培养基原料的灭菌、微生物接种的流水线作业，同时能够保障灭菌与接种过程在密封环境中进行，避免污染发生，在不破坏培养基原料营养性状的前提下达到彻底灭菌的目的。