本发明公开了一种美洲大蠊的鉴别方法，具体是：将待测样本经酶解处理，制成供试品溶液；然后对供试品溶液进行液质联用检测，以确定所述待测样本是否为美洲大蠊；其中，采用电喷雾正离子模式进行多反应监测，以特征肽段离子对进行MRM扫描。本发明的鉴别方法基于寻找到的特征肽，采用质谱的多反应监测，通过特征离子对的检出来区别美洲大蠊及其混伪品，该方法的特征性强，灵敏度高，能对于美洲大蠊的各种混伪品种进行鉴别，并且可以适用于无法进行DNA鉴定检测的相关提取物及制剂的鉴别。