本发明公开了一种稠油降粘降解混合菌剂的制备方法及应用方法，混合菌剂包括：不动杆菌Acinetobacter sp.strain ZX‑15，无色杆菌Achromobacter pulmonis strain PI3‑03，不动杆菌Acinetobacter sp.RS206和苍白杆菌chrobactrum anthropi strain CON21。本发明中的不动杆菌属Acinetobacter sp.strain ZX‑15和无色杆菌属Achromobacter pulmonis strain PI3‑03为高效石油烃降解菌，不动杆菌属Acinetobacter sp.RS206和苍白杆菌属chrobactrum anthropi strain CON21为高效稠油降粘菌。本发明公开的稠油降粘降解混合菌剂是一种人工筛选构建的混合菌剂，菌种成分明确，制备工艺简单，对稠油的降解效率高，且有较好的降粘效果，在环境治理方法具有良好的应用前景和工业化生产潜力。