本发明属于生物医用材料技术领域，公开了一种聚谷氨酸接枝二甲双胍立构纳米胶束的制备方法，包括分别将N‑羧基‑L‑谷氨酸‑环内酸酐和N‑羧基‑D‑谷氨酸‑环内酸酐酰卤化，再与二甲双胍缩合反应；将缩合反应得到的N‑(N，N‑二甲基氨基甲酰胺基)氨基甲酰胺基)‑N‑羧基‑L‑谷氨酸‑环内酸酐和N‑(N，N‑二甲基氨基甲酰胺基)氨基甲酰胺基)‑N‑羧基‑D‑谷氨酸‑环内酸酐与N‑羧基‑L‑谷氨酸‑环内酸酐、N‑羧基‑D‑谷氨酸‑环内酸酐进行嵌段共聚，然后加入PEG4000、抗肿瘤药物并混合均匀，用滤膜挤出。本发明制备方法制备得到的纳米胶束结构稳定，有较高的包封率和载药率，且释放药物速率较缓慢。