本发明提供了一种雷公藤药材及其制剂雷公藤多苷片中雷公藤内酯甲的测定方法，以0.1mg.mL‑1的雷公藤内酯甲的乙醇溶液为对照品溶液，通过溶剂系统正己烷、乙酸乙酯、乙醇和水的建立并优化获得了相应体积比范围，使雷公藤内酯甲在溶剂系统中的分配系数K在0.5‑2之间，通过对液液分配色谱分离柱转速和流动相流速的优化与控制，结合高效液相色谱检测雷公藤药材及其制剂雷公藤多苷片中雷公藤内酯甲的方法。该方法操作过程简单，专属性强，重现性好，分离成本大大降低，雷公藤内酯甲色谱分离度高，产品回收率高，样品用量少，稳定性好，精密度高，定性、定量准确度高，能够对雷公藤药材及雷公藤多苷片的品质进行有效评价。