本发明公开了一种干细胞生物活性组合物及其制备方法与应用，所述干细胞生物活性组合物含有1.69‑22.24pg/mL EGF、2443.17‑4459.43pg/mL bFGF、1.44‑134.36pg/mL beta‑NGF、1.55‑355.14pg/mL VEGF、11.87‑159.70pg/mL PDGF‑DD、135.79‑688.13pg/mL KGF、1176.99‑3825.79pg/mL TGF‑β1，所述干细胞生物活性组合物具有高纯度、高产量、高生物活性。