本发明属于酶制剂的制备，特别是指葡萄糖氧化酶冻干粉的制备方法。按照公开号CN107937360A中的方法制备含有葡萄糖氧化酶的发酵液；将含有葡萄糖氧化酶的发酵液高速离心去除发酵液中的菌体，将离心后上清液用无水乙醇纯化后用磷酸盐缓冲液稀释至所需酶活；加入PEG2000作为冻干保护剂使其充分溶解并在酶液中分布均匀；预冻后置于真空冷冻干燥剂内冷冻干燥得到淡黄色葡萄糖氧化酶冻干粉。本发明解决了目前葡萄糖氧化酶直接进行冷冻干燥导致的酶活回收率低的问题，具有葡萄糖氧化酶冻干粉酶活回收率高、易于保存和运输、为葡萄糖氧化酶应用于生物医药、饲料及食品加工等领域提供了便利等优点。