本发明公开了一种大果榕中的异黄酮新化合物的制备方法及其应用，该异黄酮新化合物的制备如下：将大果榕根粉碎后过筛，用醇溶液冷浸提取，减压浓缩后得浸膏，浸膏中加入蒸馏水悬浮，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取得各部位浸膏；乙酸乙酯浸膏经柱层析、高效液相即得到异黄酮新化合物。本发明从大果榕中提取的异黄酮新化合物具有较好的抑制三种肿瘤细胞增殖作用。