本发明公开了一种密花核果木茎提取物的制备方法，是在密花核果木茎的干燥粉末中加入溶剂提取；提取液经过滤、减压浓缩得到总提取物，加水混悬，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取，减压回收分别得到石油醚部分、氯仿部分、乙酸乙酯部分和正丁醇部分，所得石油醚部分包括3个三萜类化合物、7个甾醇类化合物和1个甘油酯衍生物。本发明制得的提取物得率高，工艺流程简单，成本低廉，适合较大规模的制备，提取物具有很好的抗肿瘤活性，可以应用于预防和治疗肿瘤药物中。