本发明涉及生物医药领域，具体涉及用于筛选Nrf2激活剂的重组质粒及其构建方法和用途，其中所述重组质粒包含一个或两个以上相互串联的抗氧化反应元件以及基础转录元件、分泌型荧光素酶基因、分泌型碱性磷酸酶基因。与现有技术相比，本发明采用分泌型荧光素酶作为报告基因，其检测灵敏度高，检测荧光素酶基因活性时无需裂解细胞，实现了抗氧化剂高通量的筛选和比较，以及长期效应的检测，为筛选抗氧化剂或检测抗氧化剂活性提供了一种高效、快速、简便的方法，可应用于具有抗氧化作用天然药物和人工合成的化合物的筛选。