本发明涉及经修饰的RNAi多核苷酸及其用途，具体涉及改进的RNAi构建体及其用途。所述构建体具有19‑49个核苷酸的双链区域，具有选择性最小修饰，以赋予生物活性、毒性、稳定性和靶基因特异性的最佳平衡。如可修饰有义链(如有义链的一端或两端被四个2′‑O‑甲基修饰)，使得所述构建体不被Dicer或其他RNA酶III切割，并且全长反义链被载入RISC中。另外，所述反义链也可在5′端第二个核苷酸处被2′‑O‑甲基修饰，以大大降低脱靶沉默。本发明的构建体在很大程度上避免了在哺乳动物细胞中的干扰素应答和序列非依赖性凋亡，显示出更好的血清稳定性和提高的靶标特异性。