本发明公开了一种同时测定血浆中ACC007、拉米夫定和替诺福韦的方法，先对血浆样品预处理，再采用高效液相色谱串联质谱进行定量测定，利用内标法定量，同时对血浆中三种药物的浓度进行分析测定。该方法灵敏度高、特异性强、精密度好、准确度高、稳定性好、提取回收率高、无明显基质效应和稀释效应等优点，适用于同时分析血浆中ACC007、拉米夫定和替诺福韦的量。