本发明公开了一种树枝状葡糖基纳米颗粒的生物合成方法，属于碳水化合物深加工技术领域。本发明以环状糊精为原料，通过基于体外多糖酶制剂协同催化的一锅法合成技术制备得到树枝状葡糖基纳米颗粒。本发明方法不仅工艺简单、反应条件可控和连续化生产，还具有低成本、环境友好等特点，并且所得树枝状葡糖基纳米颗粒的直径尺寸20‑100nm，绝对分子量大于1.0×105g/mol，多分散系数不超过1.3，分支密度6‑12％，可广泛作为载体用于营养食品、药品、化妆品等行业。