本发明公开了一种表达质粒、一种用于包装二代腺病毒的细胞株及其应用。本发明的细胞株于2019年05月08日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO : C2019111，分类命名是人胚肾转化细胞AY293‑6015。本发明的细胞株包含腺病毒的E4‑ORF6/7基因，能够用于包装E4基因缺失的二代腺病毒而形成完整的具有感染性的二代腺病毒颗粒。本发明的真核质粒以RSV启动子代替病毒载体中常用的CMV启动子，减少了病毒细胞包装中同源重组的发生几率，降低了RCA的形成。