本发明属于医药技术领域，具体涉及一种蛇床子素微乳及其制备方法和应用。所述蛇床子素微乳包括蛇床子素和辅料，其中辅料包括混合乳化剂、油酸乙酯和去离子水；所述混合乳化剂包括聚氧乙烯35蓖麻油、15‑羟基硬脂酸聚乙二醇酯和聚乙二醇400。本发明的蛇床子素微乳对损伤细胞均有不同程度的保护作用，尤其是以10μmol/L的蛇床子素微乳对细胞的保护作用效果最佳。