本发明公开了一种细菌多糖O糖基化修饰的重组霍乱毒素B亚单位融合蛋白及其应用。本发明提供了一种多糖和蛋白的偶联物，由细菌多糖和重组霍乱毒素B亚单位融合蛋白偶联而成；所述细菌多糖以O‑糖苷键形式连接在所述重组霍乱毒素B亚单位融合蛋白的糖基化位点上。实验发现，本发明细菌多糖O糖基化修饰的重组霍乱毒素B亚单位融合蛋白用于细菌多糖蛋白结合疫苗的制备，可以提高诱导动物产生抗多糖抗体的能力，并可避免病原菌培养的诸多问题，提高疫苗的均一性以及生产效率，降低疫苗制备的成本，因此具有广泛的应用前景。