本发明涉及一种高效液相色谱法分离和测定盐酸左西替利嗪及其5种有关物质的方法，该方法色谱柱为C18色谱柱，用含有庚烷磺酸钠和乙腈的混合液溶液的流动相洗脱后检测，流动相中还加入了碱。该方法可以同时对盐酸左西替利嗪片中盐酸左西替利嗪及其左西替利嗪乳糖酯、左西替利嗪聚乙二醇酯、对氯二苯甲酮、对氯二苯甲醇及对氯二苯甲基哌嗪5种有关物质中的任一一种或多种进行分离检测。与现有技术相比，盐酸左西替利嗪与各有关物质分离度较好，灵敏度高，并提高了分离检测效率。