本发明属于生物化学领域，具体属于生物化学相关的测定或检测领域；更具体涉及一种TOP2A基因的FISH探针的制备方法，及由该方法制备出的探针。本发明提供的方法使用BAC克隆、酶切打断以及不对称扩增等方法制备探针文库，使得产品灵敏度、特异性以及信号强度均得到有效提高。