本发明属于生物医药及基因工程领域，涉及一种基于人乙型肝炎病毒的重组载体，所涉及得病毒基因组相对于野生型人乙型肝炎病毒缺失了乙型肝炎病毒聚合酶的间隔区的部分或者全部及核心蛋白的部分，并在聚合酶起始密码子前插入有核糖体进入位点。本发明还提供了该重组载体的制备方法及其在靶向肝脏或者肝细胞的基因治疗方面的应用。本发明的人乙型肝炎病毒重组载体支持多种外源序列的插入和基因表达；重组乙肝病毒自身无基因组复制能力，但在提供核心蛋白的情况下重组乙肝病毒基因组可高效复制，并在同时提供核心蛋白和表面蛋白的情况下包装、分泌具有感染性的完整重组乙肝病毒颗粒，表明本发明的重组人乙肝病毒载体作为肝脏特异性的基因导入载体具有良好应用前景。