本发明公开了一种多酶级联生产(R/S)‑羟基蛋氨酸的方法，属于生物工程技术领域。本发明利用一锅法同步反应催化蛋氨酸生产(R)‑HMTBA，通过分批补料解除底物抑制，转化周期由23h缩短至15h，(R)‑HMTBA产量可达到97.0g/L，ee>99％，蛋氨酸摩尔转化率达到96.3％；利用一锅法同步反应催化蛋氨酸生产(S)‑HMTBA，通过分批补料解除底物抑制，转化周期由23h缩短至18h，(S)‑HMTBA产量可达到98.0g/L，ee>99％，蛋氨酸摩尔转化率达到98.6％。