本发明公开了一种阿拉伯低聚半乳糖及其制备和应用。该阿拉伯低聚半乳糖由重量百分含量为99％以上的多糖组成，所述多糖由阿拉伯糖与半乳糖组成，其中阿拉伯糖与半乳糖的摩尔比为1 : 16；阿拉伯低聚半乳糖的重均分子量为4000Da‑5000Da。其制备方法采用两步酶解，并采用超滤和纳滤耦合的方式对降解后的阿拉伯低聚半乳糖进行分离纯化，定向获得重均分子量4000Da‑5000Da阿拉伯低聚半乳糖，大大缩短了纯化时间，解决了现有技术不容易分离出某一固定值分子量低聚多糖的问题。本发明阿拉伯低聚半乳糖的支链取代度降低，其生物功能活性明显增强，对双歧杆菌等益生菌具有明显的体外促生长作用，因此阿拉伯低聚半乳糖可作为功能性低聚多糖应用于食品添加剂、保健品及医药领域。